家兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞的表達(dá)研究碩士論文
所有動物的飼養(yǎng)及處死均按照nih的《實(shí)驗動物管理及使用指南》進(jìn)行。
卡波姆(carbomer一940,美國古立德化學(xué)公司);質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.15%地塞米松(江蘇連水制藥廠);sabc法免疫組織化學(xué)試劑盒、aqp一1多克隆抗體(武漢博士德公司);trizol一步法組織總rna提取試劑盒、一步法逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(one-stepreverse transcription polymerase chain reaction.rt-pc r)試劑盒(美國invitrogen公司)。
3o只家兔按完全隨機(jī)原則分為5組，分別為對照組，2、3、4、5周組，每組6只。家兔經(jīng)25 g/l異戊巴比妥鈉60 mg/kg耳緣靜脈注射進(jìn)行全身麻醉，質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.4% 鹽酸奧布卡因滴眼液點(diǎn)眼2次進(jìn)行表面麻醉，實(shí)驗組用1 ml消毒空針自家兔左眼角膜緣內(nèi)1 mm刺入前房，抽出房水0.2 ml,注入0.2 ml復(fù)方卡波姆溶液(含質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.3% 卡波姆和0.025%地塞米松)制作高眼壓模型。對照組左眼同法注入平衡鹽液0.2 ml.術(shù)畢，雙眼點(diǎn)用氯霉素滴眼液。造模后每日測量眼壓1次，裂隙燈下觀察眼結(jié)膜、角膜及虹膜等的反應(yīng)。將h艮壓升高至>22 mmhg(1 mmhg=0.133 kpa)，并能持續(xù)1周以上者為高眼壓模型制作成功。建模后2周，處死對照組和2周組動物，3、4、5周時分別處死相應(yīng)組動物，摘除左眼眼球。各組取3只眼球儲存于一70℃ 冰箱中用于rt-pcr檢測;另外3只眼用質(zhì)量分?jǐn)?shù)4% 多聚甲醛溶液固定，石蠟包埋，用于免疫組織化學(xué)檢測。