畢業(yè)論文引言

　　1.4  核苷酸的結(jié)構(gòu)性質(zhì)與檢測

　　1.4.1  核苷酸的結(jié)構(gòu)性質(zhì)

　　核苷酸是核酸的組成單位，它由三部分組成，分別為磷酸、戊糖和堿基。核苷酸按戊糖的種類不同，可以分為核糖核苷酸和脫氧核糖核苷酸兩種，其中核糖核苷酸是rna的組成單位，而脫氧核糖核苷酸則是dna的組成單位。組成rna的核糖核苷酸按照核苷酸分子堿基的不同，核苷酸可以分成四種，即5’-腺嘌呤核苷酸（amp）、5’-鳥嘌呤核苷酸(gmp)，5’-胞嘧啶核苷酸(cmp)和5’-尿嘧啶核苷酸(ump)。

　　5’-腺嘌呤核苷酸（5’-amp）分子量347.22，自丙酮水溶液中可得含有兩分子水的結(jié)品。溶于熱水，pk3.8(堿性基團)<1，6.2-6.4(磷酸根)。

　　5’-鳥嘌呤核苷酸（5’-gmp:）分子量363.23，含1/2分子水的結(jié)品，pk2.4(堿性基團)、9.4(酸性基團)<1，6.1(磷酸根)。熔點190-200℃(分解)。   

　　5’-尿嘧啶核苷酸（5’-ump）分子量324.18，pk9.5(堿基上酸性基團) <1，6.4(磷酸根)。

　　5’-胞嘧啶核苷酸（5’-cmp)分子量323.21，熔點233℃(分解)。pk4.5(堿性基團)<1，6.3(磷酸根)。

　　四種核苷酸的結(jié)構(gòu)式如下圖所示：

　　實際使用中，四種核苷酸主要以鈉鹽形式存在。其形態(tài)均為無色至自色結(jié)晶或白色結(jié)晶性粉末，在保藏和應(yīng)用中多為核苷酸的二鈉鹽。

　　1.4.2  核苷酸的檢測

　　核酸水解產(chǎn)物核苷酸、核苷和堿基的分析方法，主要有光譜法（紫外光吸收法）、質(zhì)譜法、色譜法（高效液相色譜法、離子色譜、反相高效液相色譜（rp-hplc）、薄層色譜）、電泳法（毛細管電泳）等。其中毛細管電泳和高效液相色譜法的分離能力最強，在細胞分離方面有廣泛的用途，尤其是高效液相色譜法（hlpc）應(yīng)用很多，紫外光吸收法應(yīng)用方便，但準(zhǔn)確率不高。離子交換液相色譜法具有較高的分離效率，但是需要對分離柱進行再生，分析的時間較長；反相液相色譜法具有快速、操作方便的特點，現(xiàn)有離子對反相和常規(guī)反相色譜，洗脫方法可采用等度洗脫，也可采用梯度洗脫。目前有許多關(guān)于核苷酸檢測這方面的報道：張志國，賈云虹等用hplc和紫外檢測方法對乳粉中的四種核苷酸cmp、ump、amp、gmp含量進行了檢測，采用c-18柱，據(jù)報道結(jié)果完全符合要求。吉瓊梅等人用0.05mol/l的kh2po4為流動相的高效液相色譜法測定了棉寶中的5’-amp、5’-cmp、5’-gmp、5’-ump的分解率。黃曉蘭、李科德和陳云華報道采用反相高效液相色譜可以分離15種核酸的水解產(chǎn)物，并介紹了該方法在酵母抽提物中的應(yīng)用。霍小敏、屠春燕等人用反規(guī)液相色譜和梯度洗脫模式對酵母rna降解的4中核苷酸進行了分離和檢測。鄭理、朱懷恩等人用紫外光吸收法對保健品中的核酸含量進行了測定[7]。鄒耀洪、曹學(xué)增等對以hplc（高效液相色譜）與lc/ms(質(zhì)譜)復(fù)合定性蘑菇柄中的5’-核苷酸進行了報道。韓鳳梅、楊新等人對四種單核苷酸的毛細管區(qū)帶電泳分離分析進行了報道。

　　1.5  核苷酸的生產(chǎn)應(yīng)用

　　1.5.1  核苷酸生產(chǎn)方法概況

　　目前已經(jīng)有多種方法可生產(chǎn)核苷酸及其衍生物。歸納起來，主要有以下三種：化學(xué)合成法、微生物發(fā)酵法及提取法。三種方法生產(chǎn)的工藝及產(chǎn)品均有很大的差別。