羊水細胞培養在產前診斷中的應用價值論文
資料與方法
一般資料 選擇2017年4月～2017年4月在本院產科就診的具有產前診斷指征的178例孕婦， 年齡20～47歲， 孕周16～25周， 有70例孕婦唐氏綜合征篩查為陽性， 23例孕婦有異常生育史， 60例孕婦年齡≥35歲， 14例婦女于早孕服藥， 6例孕婦神經管急性篩查為陽性， 5例孕婦丈夫染色體異常。
方法
羊膜穿刺 經b超定位后， 在無菌條件下， 用一次性羊水穿刺針行羊膜穿刺術。舍棄最開始的2 ml羊水， 再抽取20～30 ml的羊水放入2支無菌離心試管中。
羊水細胞培養 以1000 r/min的離心速度將2支無菌試管中的羊水進行離心處理達10 min， 舍棄上層清液， 保留管內沉淀細胞和0.5 ml羊水， 加入20%胎牛血清及含張氏成分的5 ml f10培養基， 用細管使之混勻， 將其接種于t-25的無菌試管中， 在37℃有5%二氧化碳培養環境中進行培育， 5 d后觀察細胞生長情況， 若發現纖維狀或者梭狀細胞生長是， 則可更換5 ml新鮮培養液進行傳代培養[2]。
收獲細胞并進行制片 在對羊水細胞進行培養6～7 d后， 在倒置的顯微鏡下對正在培養的羊水細胞進行觀察， 觀察其生長情況， 發現有不同大小的梭長形細胞正在進行克隆并生長， 每個克隆過的細胞其生長狀態良好并且已經形成細胞島。對培養皿中的培養液進行定時的更換， 每天對細胞進行觀察， 在觀察2～3 d后， 發現每個形成的細胞島已經逐漸長成為透亮細胞， 這些細胞較大， 細胞融合度達到70%～80%， 并且數目不等， 形狀多呈圓形或類圓形， 這時即可對細胞進行收獲。在對細胞進行收獲的前1 d， 更換新鮮培養液， 在培養液中加入秋水仙素， 使其濃度達到0.1 mg/ml， 在4～5 h后， 使用顯微鏡觀察， 發現培養液中出現大量的呈魚眼狀的細胞時， 即可對細胞終止培養并進行收獲。加入0.25%的2 ml胰酶消化液， 在37℃的環境下放置5 min， 使得瓶壁上細胞脫落， 再以1500r的轉速離心處理8 min， 棄上清液。加入1.5 ml的0.4%枸緣酸鈉和0.4%的氯化鉀混合液低滲7 min， 滴片， 常規g顯帶。每張玻片有20～30個細胞分裂相， 進行染色體核型分析， 每例分析核型5個。
核型統計分析 使用顯微鏡對細胞核型進行觀察， 常規技術分散良好的細胞核型有30個中期分裂相， 細胞核型計數發生異常的則有50個分裂相， 如出現≥2個細胞核型計數異常， 則對所有分裂相進行計數， 使用染色體核型分析軟件對核型圖像進行采集， 對3～5個核型進行分析， 并完成報告， 為遺傳咨詢提供意見。